2015年执业西药师辅导:细胞色素C活力测定法
发布时间：2010/3/14 11:03:56 来源：城市学习网 编辑：MOON
试剂
磷酸盐缓冲液
取磷酸氢二钠71.64g，加水使溶解成1000ml，作为甲液。另取磷酸二氢钠27.60g，加水使溶解成1000ml，作为乙液。取甲液81ml与乙液19ml，混匀，调节pH值至7.3。
磷酸盐缓冲液
取磷酸盐缓冲液500ml，加水稀释成1000ml，调节pH值至7.3。
磷酸盐缓冲液
取磷酸盐缓冲液100ml，加水稀释成1000ml，调节pH值至7.3。
琥珀酸盐溶液
取琥珀酸与氢氧化钾各4.72g，加水使溶解成100ml，调节pH值至7.3。
氰化钾溶液 取氰化钾0.65g，加水使溶解成100ml后，用稀硫酸调节pH值至7.3。
去细胞色素C的心悬浮液取磷酸盐缓冲液5ml、琥珀酸盐溶液1.0ml与供试品溶液0.5ml（如系还原型制剂，应加入0.01mol/L铁氰化钾溶液0.05ml），置25ml具塞比色管中，加去细胞色素C的心悬浮液0.5ml与氰化钾溶液1.0ml，加水稀释至10ml，摇匀，以同样的试剂作空白，照分光光度法（附录Ⅳ A），在550nm的波长处附近，间隔0.5nm找出最大吸收波长，并测定吸收度，直至吸收度不再增大为止，作为酶还原吸收度；然后各加连二亚硫酸钠约 5mg，摇匀，放置约10分钟，在上述同一波长处测定吸收度，直至吸收度不再增大为止，作为化学还原吸收度；按下式计算。
酶还原吸收度
细胞色素C活力＝───────────×100％
化学还原吸收度
