2015年检验士复习:结核杆菌核酸扩增荧光检测
发布时间：2010/3/17 16:12:03 来源：城市学习网 编辑：moon
1．目的：保证TBDNA检测结果准确、可靠。2．适用范围：TBDNA的TaqMan荧光定量检测，标本类型为血清。3．负责人：操作人：4．原理：本试剂盒用一对结核杆菌特异引物和一条结核杆菌特异性荧光探针，PCR反应液，耐热DNA聚合酶，四种核苷酸单体等成分，再用PCR体外扩增法检测结核杆菌DNA。5．性能参数：检出低值＜1103基因拷贝/ml。6．标本要求：标本类型：血清。标本采集：见标本采集手册。标本储存和运输：室温放置不超过8小时，4-8℃不超过72小时，-20℃保存期6个月，应避免反复冻融。室温运输。标本拒收状态：细菌污染、严重溶血或脂血标本不能作测定。7．容器和添加剂类型：无菌离心管和无菌真空管。8．所需设备：ABIGeneAmp5700、台式高速离心机、混匀器、冰箱、生物安全柜、紫外灯9．试剂：DNA提取液2管；TB-PCR反应液20管；阳性定量质控标准品1管；阴性质控品1管。10．校准程序：送深圳市计量检测所校准。11．程序步骤：11.1标本处理：标本采集、保存和运送用无菌5ml玻璃管取受检者肺深部咳出痰液1~3ml，密闭，即为标本。或直接抽取外周血2ml。标本可立即用于测试，也可保存于-20℃待测，保存期为六个月。标本运送应采用0℃冰壶。11.2标本及质控标准品的处理痰液中加入4倍体积的4%NaOH室温放置10分钟后15000rpm离心5分钟。去上清，沉淀加无菌生理盐水1ml打匀，15000rpm离心5分钟；再重复洗涤一次。沉淀直接加50ulDNA提取液充分混匀，沸水浴10分钟，转至4℃静置6-8小时以保证充分裂解。10，000rpm离心5分钟，取上清液2ul做PCR反应。另取阴阳性质控标准品各40ul加等量DNA提取液打匀，沸水浴10分钟后同上处理。
