★二、紫外-可见分光光度计

　　(一)基本结构：

　　光源 紫外：氘灯或氢灯;可见: 钨灯或卤钨灯

　　单色器 色散元件(光栅或棱镜);狭缝

　　吸收池 紫外: 石英; 可见: 玻璃, 石英

　　检测器 光电池、光电管、光电倍增管、光二极管阵列检测器

　　数据记录和处理

　　(二)仪器的校正和检定

　　(1) 波长的校正 汞灯或氘灯的特定谱线为参照或钬玻璃的特定波长

　　(2)吸光度的准确度检定 用重铬酸钾的硫酸溶液

　　(3)杂散光的检查 一般来源于光学仪器表面的瑕疵

　　三、 吸光度的测定要求

　　1. 溶剂 应符合规定

　　2. 作空白试验校正 目的：消除溶剂和吸收池的影响

　　3. 测定波长的检查 一般以吸光度最大的波长 max为测定波长，吸收峰的波长应在该品种规定波长的±2%以内，否则应考虑供试品的真伪、纯度及仪器波长正确性。

　　影响波长检查结果的条件有：供试品的真伪与纯度、溶剂的种类 、仪器波长的正确性

　　4. 供试品溶液浓度 使吸光度在0.3-0.7范围内

　　5. 仪器狭缝宽度的选择 调至供试品溶液的吸光度不再增加为止

　　♣♣四、应用

　　(一)鉴别 《中国药典》所采用方法：

　　1. 核对吸收光谱的特征参数：最大吸收波长lmax，吸收系数E1%1cm;吸光度 A

　　2. 比较吸光度比值： Al1 /Al2®El1/El2

　　3. 比较吸收光谱的一致性

　　(二)杂质检查：

　　依据：药物与杂质的结构不同，故吸收光谱也不同。

　　1. 药物在紫外可见光区没有明显吸收，所含杂质有较强吸收¾¾少量杂质可用光谱检索出来。

　　2. 药物有较强吸收;杂质无吸收或很弱¾E(e)¯ 或杂质有更强吸收¾¾ E(e)­

　　规定吸光度的上下限可在一定程度上控制杂质的量

　　(三)含量测定：

　　紫外分光光度法用于含量测定的方法有三种：前三种方法

　　(1)对照品比较法：

　　 AR/AX=ECRL / ECXL =CR/ CX Þ CX=(AX/AR)CR

　　供试品溶液与对照品溶液浓度C及测定条件应一致，E、L相等

　　(2)吸收系数法(绝对法)：

　　♣♣♣♣ A=E1%1cm CL ÞC=A/(E1%1cmL)

　　对仪器须进行严格的校正和检定(波长的准确度、狭缝宽度符合要求)，否则影响准确度

　　(3)计算分光光度法 如双波长分光光度法、导数光普法

　　主要用于消除样品中干扰组分的干扰

　　(4)比色法(属于可见分光光度法) 显色剂显色后测定

　　§2. 荧光分析法

　　一、基本原理

　　(一)荧光的产生：某些物质受紫外光或可见光照射激发后，能发射出比激发光波长更长的荧光;除去激发光源，荧光立即熄灭。

　　荧光的能量小于激发光的能量，波长则长于激发光。

　　(二)荧光光谱

　　荧光激发光谱¾¾荧光的激发光波长为横坐标;发射光强度为纵坐标

　　荧光发射光谱¾¾激发光波长和强度不变，荧光物质的不同荧光波长为横坐标;发射光强度为纵坐标

　　激发光波长、强度不变，测定用溶剂、温度等条件一定时，荧光强度与物质浓度成正比——定量依据。[NextPage]

　二、荧光分光光度计

　　§3. 红外分光光度法(Infrared Spectrometry，缩写IR)

　　一、基本原理

　　红外吸收光谱：是由分子的振动及转动能级跃迁引起的，又称为分子的振-转光谱。为物质分子吸收波数在4000-400cm-1范围的红外光而产生的吸收光谱。

　　振动过程中，若分子偶极矩发生变化，则相应振动为红外活性振动，产生吸收峰。没有偶极矩变化的振动为红外非活性振动。偶极矩变化越大，红外吸收越强，如C=O，强吸收峰。

　　二、红外光谱仪

　　(一)基本结构：

　　(样品室) 多用KBr压片

　　(二)仪器的校正和检定

　　1. 波数的准确性 校正方法中所用测试样品为聚苯乙烯薄膜，绘制其红外光谱图

　　2. 分辨率 用聚苯乙烯薄膜的红外光谱图检查

　　光度法仪器比较

　　三、红外光谱与物质结构的关系

　　1. 纵坐标—透光率;横坐标—波数(cm-1)或波长(mm)

　　2. 特征区与指纹区

　　ª 1900～1650 cm-1，羰基峰(C=O)很少与其它峰重叠，谱带强度很大¾¾最易识别的吸收峰，最受重视

　　3. 典型化学键的红外特征吸收峰

　　P352页表5-3 典型化学键的红外特征吸收峰表

　　★★ 典型化学键的红外特征吸收峰

　　3750～3000 cm-1 ¾¾羟基O-H 氢氧伸缩振动

　　2400～2100 cm-1 ——氰基C≡N;炔基C≡C

　　1900 ～ 1650 cm-1——强吸收的基团，羰基C=O 由羰基C=O伸缩振a动所引起

　　1670～1500 cm-1 ¾¾苯环的骨架振动。